chromatography dareere ah waa habka ugu muhiimsan ee lagu tijaabiyo waxa ku jira qayb kasta iyo wasakhda alaabta ceeriin, dhexdhexaadinta, diyaarinta iyo alaabta baakadaha, laakiin walxo badan ma laha hababka caadiga ah ee lagu tiirsado, sidaas darteed waa lama huraan in la horumariyo habab cusub. Horumarinta hababka dareeraha dareeraha, tiirka chromatographic waa udub dhexaadka chromatography dareeraha, markaa sida loo doorto tiir chromatographic ku habboon ayaa muhiim ah. Maqaalkan, qoraagu wuxuu sharxi doonaa sida loo doorto tiir chromatography dareere ah saddex dhinac: fikradaha guud, tixgelinta iyo baaxadda codsiga.
A. Fikradaha guud ee doorashada tiirarka chromatography dareeraha ah
1. Qiimee sifooyinka jidheed iyo kiimikaad ee falanqeeyaha: sida qaab-dhismeedka kiimikada, milanka, xasiloonida (sida haddii ay fududahay in la oksijiyeen / la yareeyo / hydrolyzed), acidity iyo alkalinity, iwm, gaar ahaan qaab-dhismeedka kiimikaad ayaa fure u ah. arrin lagu go'aaminayo guryaha, sida kooxda isku xidhan waxay leedahay nuugista ultraviolet xoog leh iyo iftiin xoog leh;
2. Go'aami ujeedada falanqaynta: haddii loo baahan yahay kala-soocid sare, waxtarka tiirka sare, waqtiga falanqaynta gaaban, dareenka sare, caabbinta cadaadiska sare, nolosha tiirarka dheer, kharash yar, iwm.
- Dooro tiir chromatographic ku habboon: faham halabuurka, sifooyinka jidheed iyo kiimikaad ee buuxinta chromatographic, sida cabbirka walxaha, cabbirka daloolka, dulqaadka heerkulka, dulqaadka pH, xayeysiinta falanqaynta, iwm.
- Tixgelinta doorashada tiirarka chromatography ee dareeraha ah
Cutubkani waxa uu ka hadli doonaa arrimaha la tixgelinayo marka la dooranayo tiirka chromatography marka laga eego dhinaca sifooyinka jidheed iyo kiimikaad ee tiirarka chromatography laftiisa. 2.1 Filler matrix
2.1.1 Silica gel matrix Matrixka buuxinta tiirarka chromatography ee dareeraha badankoodu waa jel silica. Buuxiyaha noocaan ah wuxuu leeyahay nadiif sare, qiimo jaban, xoog farsamo oo sarreeya, waana sahlan tahay in wax laga beddelo kooxaha (sida fenyl bonding, bonding amino, cyano bonding, iwm.), laakiin qiimaha pH iyo kala duwanaanta heerkulka ay u dulqaadanayso waa xaddidan yihiin: Kala duwanaanta pH ee inta badan silica gel matrix buuxinta waa 2 ilaa 8, laakiin kala duwanaanta pH ee wejiyada silica gel-ka-xidhan ee sida gaarka ah wax looga beddelay waxay noqon karaan ilaa 1.5 ilaa 10, sidoo kale waxaa jira wejiyada silica gel bonded si gaar ah loo beddelay kuwaas oo deggan pH hoose, sida Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, kaas oo deggan pH 1 ilaa 8; Xadka sare ee heerkulka matrix silica gel sida caadiga ah waa 60 ℃, iyo tiirar chromatography qaar ka mid ah waxay u dulqaadan karaan heerkulka 40 ℃ at pH sare.
2.1.2 Buuxiyeyaasha matrixka polymer-ka ah waxay u badan yihiin polystyrene-divinylbenzene ama polymethacrylate. Faa'iidadooda ayaa ah inay u dulqaadan karaan pH ballaaran - waxaa loo isticmaali karaa inta u dhaxaysa 1 ilaa 14, waxayna aad ugu adkaysanayaan heerkulka sare (waxay gaari karaan in ka badan 80 ° C). Marka la barbardhigo buuxinta C18-ku-saleysan silica, buuxinta noocaan ah waxay leedahay hydrophobicity xoog badan, polymer-ka makroporous wuxuu aad wax ku ool u yahay kala soocida muunadaha sida borotiinnada. Khasaarooyinkeeda ayaa ah in waxtarka tiirarka uu hooseeyo oo xoogga farsamada uu ka daciifsan yahay kuwa buuxinaya silica. 2.2 Qaabka qaybta
Inta badan buuxinyaasha HPLC ee casriga ahi waa qaybo wareegsan, laakiin mararka qaarkood waa qaybo aan joogto ahayn. Qaybaha wareegsan waxay ku siin karaan cadaadiska hoose ee tiirka, waxtarka tiirka sare, xasilloonida iyo nolosha dheer; marka la isticmaalayo wejiyada moobilka ee viscosity-sare (sida phosphoric acid) ama marka xal muunad ah uu yahay viscous, qaybo aan joogto ahayn waxay leeyihiin aag gaar ah oo gaar ah, kaas oo aad ugu habboon ficilka buuxa ee labada weji, qiimuhuna waa mid hooseeya. 2.3 Cabbirka walxaha
Inta yar ee cabbirka walxaha, ayaa sarreeya waxtarka tiirka iyo sare u kaca, laakiin ka sii darnaanta cadaadiska sare. Tiirka inta badan la isticmaalo waa tiirka cabbirka walxaha 5 μm; Haddii shuruudaha kala-soocidda ay sarreeyso, buuxinta 1.5-3 μm ayaa la dooran karaa, kaas oo ku habboon xallinta dhibaatada kala-soocidda ee qaar ka mid ah matrix-ka adag iyo muunadaha qaybaha badan. UPLC waxay isticmaali kartaa buuxinta 1.5 μm; 10 μm ama ka weyn buuxinyaasha cabbirka walxaha ayaa inta badan loo adeegsadaa tiirarka diyaarinta ah ama diyaarinta. 2.4 Kaarboonka
Waxa ku jira kaarboon waxa loola jeedaa saamiga wejiga isku xidhan ee dusha sare ee jelka silica, kaas oo la xidhiidha aag gaar ah oo dusha sare ah iyo daboolka wejiga xidhan. Kaarboonka sarreeya wuxuu bixiyaa awoodda tiirka sare iyo xallinta sare, waxaana badanaa loo isticmaalaa shaybaarada adag ee u baahan kala-soocidda sare, laakiin sababtoo ah wakhtiga dheer ee isdhexgalka ee u dhexeeya labada weji, wakhtiga falanqaynta ayaa dheer; Kaarboonka hooseeya ee tiirarka chromatographic waxay leeyihiin waqti falanqayn gaaban waxayna muujin karaan xulashooyin kala duwan, waxaana badanaa loo isticmaalaa muunado fudud oo u baahan falanqayn degdeg ah iyo muunado u baahan xaalado heer sare ah oo biyo ah. Guud ahaan, maadada kaarboon ee C18 waxay u dhaxaysaa 7% ilaa 19%. 2.5 Cabbirka daloolka iyo meel gaar ah oo dusha sare ah
Warbaahinta adsorption HPLC waa qaybo dalool ah, inta badan isdhexgalka ayaa ka dhaca daloolada. Sidaa darteed, molecules waa in ay galaan daloollada si loo isku dhejiyo oo loo kala saaro.
Cabbirka daloolka iyo bedka dusha sare ee gaarka ah waa laba fikradood oo dhammaystiran. Cabbirka daloolka yar wuxuu ka dhigan yahay aag gaar ah oo gaar ah, iyo lidkeeda. Meel sare oo gaar ah oo weyn ayaa kordhin karta isdhexgalka u dhexeeya molecules muunada iyo wejiyada isku xidhan, waxay wanaajisaa sii haynta, kordhinta muunada rarka iyo awooda tiirka, iyo kala soocida qaybaha adag. Buuxiyeyaasha si buuxda u daloola ayaa iska leh buuxinta noocaan ah. Kuwa leh shuruudaha sare ee kala-soocidda, waxaa lagu talinayaa in ay doortaan buuxinyaal leh meel sare oo gaar ah; meel yar oo gaar ah oo dusha sare ah waxay yarayn kartaa cadaadiska dhabarka, hagaajinta waxtarka tiirka, waxayna yareyn kartaa wakhtiga dheellitirka, taas oo ku habboon falanqaynta gradient. Buuxiyeyaasha core-shell ayaa iska leh buuxinta noocaan ah. Marka la eego dhismaha hubinta kala-goynta, waxaa lagu talinayaa in la doorto buuxinyaal leh meel yar oo gaar ah oo loogu talagalay kuwa leh shuruudaha waxtarka falanqaynta sare. 2.6 Mugga daloolka iyo xoogga farsamada
Mugga daloolka, oo sidoo kale loo yaqaan "mugga daloolka", waxa loola jeedaa cabbirka mugga maran ee qayb kasta. Waxay si fiican u muujin kartaa xoogga farsamada ee buuxinta. Awoodda farsamada ee buuxinayaasha leh mugga daldaloolada weyn ayaa xoogaa daciif ah marka loo eego kuwa buuxinaya mugga daloolka yar. Buuxiyeyaasha leh mugga daloolka ka yar ama le'eg 1.5 mL/g ayaa inta badan loo isticmaalaa kala-soocidda HPLC, halka buuxinayaasha leh mugga daloolka ka weyn 1.5 mL/g ayaa inta badan loo isticmaalaa chromatography ka saarista molecular iyo chromatography cadaadis hooseeya. 2.7 heerka wax-soo-saarka
Capping waxay yarayn kartaa meelaha ugu sarreeya ee dabada ah ee ay keento isdhexgalka ka dhexeeya xeryahooda iyo kooxaha silanol-ka ah (sida isku-xidhka ionic ee u dhexeeya xeryahooda alkaline iyo kooxaha silanol, xoogagga van der Waals iyo bond bonds ee u dhexeeya xeryahooda acidic iyo kooxaha silanol), si kor loogu qaado waxtarka tiirka iyo qaabka ugu sarreeya. . Wejiyada xidhxidhan ee aan xidhnayn waxay soo saari doonaan xulashooyin kala duwan marka loo eego wejiyada xidhxidhan, gaar ahaan muunadaha dabaysha.
- Baaxadda codsiga ee tiirarka chromatography dareere ee kala duwan
Cutubkani waxa uu sharxi doonaa baaxadda arjiga ee noocyada kala duwan ee tiirarka chromatography dareeraha iyada oo loo marayo xaaladaha qaarkood.
3.1 Tiirka chromatographic-ka ah ee C18
Tiirka C18 waa tiirka ugu badan ee loo isticmaalo weji-rogid, kaas oo buuxin kara waxa ku jira iyo imtixaanada wasakhda ah ee inta badan walxaha dabiiciga ah, waxaana lagu dabaqi karaa walxaha dhexdhexaadka ah, polar daciif ah iyo walxaha aan polarka ahayn. Nooca iyo qeexidda tiirka chromatographic C18 waa in lagu doortaa iyadoo loo eegayo shuruudaha kala-soocidda. Tusaale ahaan, walxaha leh shuruudaha kala-soocidda sare, 5 μm * 4.6 mm * 250 mm qeexitaannada ayaa badanaa la isticmaalaa; maaddooyinka leh matries kala soocida adag iyo polarity la mid ah, 4 μm * 4.6 mm * 250 mm qeexitaannada ama cabbirrada walxaha yaryar ayaa loo isticmaali karaa. Tusaale ahaan, qoraagu wuxuu isticmaalay tiir 3 μm*4.6mm*250 mm si uu u ogaado laba wasakh oo genotoxic ah oo ku jira celecoxib API. Kala soocida labada walxood waxay gaari kartaa 2.9, taas oo ah mid aad u fiican. Intaa waxaa dheer, iyada oo la raacayo dhismaha hubinta kala-goynta, haddii loo baahan yahay falanqayn degdeg ah, tiir gaaban oo 10 mm ama 15 mm ah ayaa badanaa la doortaa. Tusaale ahaan, markii qoraagu isticmaalay LC-MS/MS si uu u ogaado wasakhowga genotoxic ee piperaquine phosphate API, tiir 3 μm*2.1mm*100mm ah ayaa la isticmaalay. Kala soocida wasakhda iyo qaybta ugu muhiimsan waxay ahayd 2.0, ogaanshaha muunad waxaa lagu dhamayn karaa 5 daqiiqo. 3.2 Tiirka phenyl-ka-laabashada
Tiirka Phenyl sidoo kale waa nooc ka mid ah tiirarka wejiga rogan. Tiirka noocaan ah wuxuu leeyahay xulasho xooggan oo loogu talagalay xeryahooda caraf udgoon. Haddii jawaabta xeryahooda caraf udgoon ee lagu qiyaaso tiirka caadiga ah ee C18 ay daciif tahay, waxaad tixgelin kartaa inaad bedesho tiirka phenyl. Tusaale ahaan, markii aan samaynayey celecoxib API, jawaabta qaybta ugu muhiimsan ee lagu qiyaasay tiirka phenyl ee isla soo saaraha iyo isla qeexida (dhammaan 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) waxay ahayd qiyaastii 7 jeer ka tiirka C18. 3.3 Tiirka-wajiga caadiga ah
Kaabista waxtarka leh ee tiirka-rogista, tiirka-wajiga caadiga ah wuxuu ku habboon yahay xeryahooda aadka u sarreeya. Haddii heerka ugu sarreeya uu weli aad u dhaqso badan yahay marka uu ka soo baxayo in ka badan 90% marxaladda aqueous ee tiirka-rogrogmi, iyo xitaa u dhow oo isku dhejiyay meesha ugu sarreysa ee dareeraha, waxaad tixgelin kartaa inaad bedesho tiirka-wajiga caadiga ah. Tiirka noocaan ah waxaa ka mid ah tiirarka hilic, column amino, column cyano, iwm.
3.3.1 Tiirka Hilic Tiirka Hilic wuxuu badiyaa ku dhejiyaa kooxaha hydrophilic silsiladda alkyl ee isku xiran si loo wanaajiyo jawaabta walxaha polar. Tiirka noocaan ah wuxuu ku habboon yahay falanqaynta walxaha sonkorta. Qoraagu waxa uu isticmaalay tiirka noocaan ah marka uu samaynayo waxa ku jira iyo walxaha la xidhiidha xylose iyo asalkiisa. Isomers-yada ka soo jeeda xylose sidoo kale si fiican ayaa loo kala saari karaa;
3.3.2 Amino column iyo cyano column Amino column iyo tiirka cyano tixraac hordhaca ah ee amino iyo cyano beddelka ee dhamaadka silsilad alkyl bonded, siday u kala horreeyaan, si loo hagaajiyo xulashada ee walxaha gaarka ah: tusaale ahaan, column amino waa doorasho wanaagsan. kala-soocidda sonkorta, acids amino, saldhigyada, iyo amides; tiirka cyano waxa uu leeyahay doorasho wanaagsan marka la kala saaro hydrogenated iyo unhydrogenated walxaha la mid ah qaabdhismeedka ay sabab u tahay joogitaanka bonds isku xiran. Tiirka Amino iyo tiirka cyano inta badan waa la isku beddeli karaa inta u dhaxaysa tiirka wejiga caadiga ah iyo tiirka wejiga gadaal, laakiin beddelaad joogta ah laguma talinayo. 3.4 Tiirka Chiral
Tiirka Chiral, sida magacu soo jeedinayo, waxay ku habboon tahay kala-soocidda iyo falanqaynta xeryahooda chiral, gaar ahaan goobta daawooyinka. Tiirkan noocan oo kale ah ayaa la tixgelin karaa marka wejiga gadaasha caadiga ah iyo tiirarka wajiga caadiga ah aysan gaari karin kala soocida isomers. Tusaale ahaan, qoraagu wuxuu isticmaalay tiir 5 μm*4.6mm*250 mm si uu u kala saaro labada isomers ee 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediamine iyo (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, iyo kala soocidda labadoodaba waxay gaadheen qiyaastii 2.0. Si kastaba ha ahaatee, tiirarka chiral waa ka qaalisan yihiin noocyada kale ee tiirarka, badanaa 1W+/qayb. Haddii ay jirto baahi loo qabo tiirarkaas, unugga wuxuu u baahan yahay inuu sameeyo miisaaniyad ku filan. 3.5 Ion tiirka sarrifka
Tiirarka isweydaarsiga Ion waxay ku habboon yihiin kala-soocidda iyo falanqaynta ions-dareenka, sida ions, borotiinnada, asiidhka nucleic-ka, iyo walxaha sonkorta qaarkood. Marka loo eego nooca buuxinta, waxay u kala qaybsan yihiin tiirarka sarrifka cation, tiirarka sarrifka anion, iyo tiirar isweydaarsiga cation adag.
Tiirarka isweydaarsiga cation-ka waxaa ka mid ah tiirar ku salaysan kaalshiyam iyo hydrogen, kuwaas oo inta badan ku habboon falanqaynta walxaha cationic sida amino acids. Tusaale ahaan, qoraagu wuxuu adeegsaday tiirarka kalsiyum-ku-saleysan marka la falanqeynayo kalsiyum gluconate iyo calcium acetate ee xalka dareeraha ah. Labada walxoodba waxay lahaayeen jawaabo adag λ = 210nm, iyo heerka kala-soocidda ayaa gaadhay 3.0; Qoraagu wuxuu isticmaalay tiirar ku salaysan hydrogen markii uu baarayay walxaha la xiriira gulukoosta. Dhowr walxood oo waaweyn oo la xidhiidha - maltose, maltotriose iyo fructose - waxay lahaayeen dareen sare oo hoos yimaada qalabka kala duwan, oo leh xaddidaad ogaanshaha sida ugu hooseeya 0.5 ppm iyo heerka kala soocida 2.0-2.5.
Tiirarka sarrifka anion waxay inta badan ku habboon yihiin falanqaynta walxaha anionic sida acids organic iyo halogen ions; tiirarka is-weydaarsiga cation ee xooggan ayaa leh awoodda is-dhaafsiga ion sare iyo xulashada, waxayna ku habboon yihiin kala-soocidda iyo falanqaynta muunado adag.
Midda kore waa horudhac ku saabsan noocyada iyo kala duwanaanshaha codsiga ee dhowr tiir oo chromatography dareere ah oo caadi ah oo ay weheliso khibradda qoraaga. Waxaa jira noocyo kale oo gaar ah oo tiirar chromatographic ah oo ku jira codsiyada dhabta ah, sida tiirarka chromatographical daldaloolada waaweyn, tiirarka chromatographic yar-yar, tiirarka chromatography ee xiriirka, tiirarka chromatographic multimode, tiirarka ultra-sare ee dareeraha chromatography (UHPLC), tiirarka chromatography dareere sare (Supercritical). SFC), iwm. Waxay door muhiim ah ka ciyaaraan dhinacyo kala duwan. Nooca gaarka ah ee tiirka chromatographic waa in lagu doortaa iyadoo loo eegayo qaabka iyo sifooyinka muunada, shuruudaha kala soocida iyo ujeedooyinka kale.
Waqtiga boostada: Jun-14-2024